肉的宰后嫩化最主要的归因于肌原纤维板材料棉形式的受到破坏，肌原纤维板材料棉形式是由内源性核球血清电离酶分解肌原纤维板材料棉和細胞骨架核球血清带来的。与两百多年来一直以来都是注重主焦点的钙核球血清酶不一样的，胱天核球血清酶（caspases）比较近成感动手效果语录题。胱天核球血清酶在細胞凋亡的进行的阶段起着至关最重要的使用，中仅caspase-3在去世后核球血清电离中的使用是几方位和多样化的，于是值得购买进的一步设计。S-亚硝基化利用改善钙移除、效果分解代谢、核球血清质分解和細胞凋亡来改善肉肥，有嫩度和持水效果。中后期设计表明S-亚硝基化能能调低依赖的联系线粒体的caspase-3级联生理反应，这应该是相关肌肉細胞凋亡和牛羊肉好品质变化无常的缘由。caspase-3的设计重大是其与細胞凋亡的的联系，但是，少有设计试论S-亚硝基化改善caspase-3的新机制。

2024年9月由深圳农林高校张万刚专家的团队在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱菌物为该研究提供了亚硝基化呈现组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

汉语副标题：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

期刊论文：Journal of Agricultural and Food Chemistry

202四年作用细胞因子：5.7

发表过时间间隔：2024年9月

企业厂家：南京农业大学

论述的原材料：蛋白

拜谱给予科技：亚硝基化修饰组学

技术工艺路经：

一、学习最后

01.Caspase-3几丁质酶

日前尚不清析NO对caspase-3的克制造用是不是归因于NO介导的S-亚硝基化，各个氧化还原电位等度的GSNO做外源性NO现货供应，以引发caspase-3的体内S-亚硝基化。毕竟显示，与找不到GSNO的组相对来说，100、200和400μM GSNO组的caspase-3渗透性强势大幅度减少（图1），与原本报导不一样。GSNO补救大幅度减少caspase-3渗透性的自身主观原因仍欠缺确立。

图1 有差异溶液浓度的GSNO加工对caspase-3活力性的不良影响

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化的情况

摸索Caspase-3的亚硝基化层度，以阐发GSNO对Caspase-3的不良反应性。经GSNO净化处理后，验测到caspase-3蛋白酶S-亚硝基化強度延长（图2）。等成果是因为，外源性GSNO培训可完成帮助caspase-3的离体S-亚硝基化。最令惊诧的是，在如果没有GSNO有的差表组中验测到一位变弱的S-亚硝基化带，这是因为caspase-3也许 引发内源性的S-亚硝基化。还有，本摸索中caspase-3的S-亚硝基化层度较高，而caspase-3的化学活化减轻，这与以前的摸索共同。其实，caspase-3的特喜欢的人S-亚硝基化呈现位点尚不明白，还是需要进那步的摸索。

图2 GSNO净化处理对caspase-3S-亚硝基化水准的的影响

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化表达组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的编码队列。暗蓝色标签的编码队列说S-亚硝基化肽，黑色标签的C说S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱图

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3溶解结血清

结核蛋清质身为某种重点的组织骨架核蛋清质，在长期保持肌组织格局类型的格局类型完正详细性和伸缩性方便起重在点功能，设计S-亚硝基化caspase-3对结核蛋清质光降解塑料的准确性认识性具重点现实意义。与Std（未用胱天核蛋清质酶-3和GSNO孵育的默认值肌黏胶纤维板核蛋清质）组优于，0 μM GSNO组（肌原黏胶纤维板和caspase-3的孵育，无GSNO）的完正详细结核蛋清质含铁为显著减小，反映出caspase-3对结核蛋清质具内在的核蛋清质淀粉水解实力。在GSNO孵育后，完正详细结核蛋清质的含铁比较突出添加（P < 0.05）。虽然，当GSNO含量偏高时，完正详细结核蛋清质的含铁维持上涨（P < 0.05）（图5）。这种发现了反映出，SNO装饰的caspase-3以水平方向信任的途径抑止结核蛋清质的光降解塑料。

图5.S-亚硝基化caspase-3分解结蛋清

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3光降解肌钙蛋白酶-T

肌钙蛋清-T (TnT)是原肌球蛋清缓解提供肌收缩毛孔的细条的都要肌原化学仟维材料蛋清。TnT的吸附更为看不出特点是论文验测到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化条件下，caspase-3对TnT的吸附具体情况如图已知6提示，与Std组（不包含caspase-3和GSNO的肌原化学仟维材料）相对于，caspase-3组中30 kDa TnT电影精彩片段更为看不出添加，表面caspase-3积极参与了TnT的吸附，不仅如此，caspase-3与GSNO的孵育以至于30 kDa TnT急剧下降。在100和200 μM GSNO组当中并没有论文验测到看不出的的差异(P > 0.05)，而当GSNO的含量做到400 μM 时，该电影精彩片段更为看不出才能减少(P < 0.05)。这样发觉表面了SNO绘制的caspase-3对TnT吸附的克打造用。结蛋清和TnT是caspase-3的太敏感底物，而GSNO外理变低caspase-3的抗逆性可能性以至于肌原化学仟维材料蛋清吸附方面变低。结合以上阐明，NO促进的S-亚硝基化会完成绘制半胱氨酸残基来缓解caspase-3的抗逆性，若想进这一步不良影晌其对结蛋清和TnT的蛋清水解反应能力素质，若想不良影晌牛羊肉的质量。

图6. S-亚硝基化caspase- 3溶解肌钙血清-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、工作小结

本研究方案重在浅谈S-亚硝基化对caspase-3淡化的直接印象以及其很快对鸡肉肌原纤维棉素体内吸附的直接印象。蛋清S-亚硝基化就可以淡化caspase-3的半胱氨酸残基，所以造成caspase-3活性酶减低，进1步抑制性了其对鸡肉肌原纤维棉素蛋清的蛋清淀粉水解程度。

三、拜谱个人总结

探析按照了酶活测定法，亚硝基化掩盖组学数据分析，WB等检查方式方法，看见蛋清酶S-亚硝基化可能掩盖caspase-3的半胱氨酸残基，这会造成了caspase-3活力的减小，齐头并进一步骤调节了其对鸡肉肌原仟维蛋清酶的蛋清酶血清质水解性能。本探析为释义蛋清酶质亚硝基化对肉嫩的宏观调控缘由带来好几回个新的第一人称视角。

拜谱生物作为一家国内领先的多组学服务公司，可提供完善成熟的核蛋白组学、遮盖核蛋白组学、基础代谢组学、转录组学等多组学产品技术服务体系，整合多组学数据进行深入挖掘分析，全面解析机制机理等，助力高分文章发表。除此之外，拜谱生物还可提供半胱氨酸品类软件，包括亚硝基化、谷胱甘肽化、硫巯基化、次磺酸性反应、total氧化反应抹除、徘徊巯基，欢迎大家咨询！

参考选取学术论文：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663